分子生物學實驗室規(guī)劃設計及凈化工程裝修要求

實驗室潔凈工程裝修，實驗室凈化工程設計主要是由我國空氣潔凈等級標準分為：100級、1000級、10000級、100000級等等。標準則劃分為：1級、2級、3級、4級、5級為準。

基因擴增實驗室（PCR實驗室）：
PCR是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法，并沒有嚴格的凈化要求，但是為了避免各個試驗區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排是氣流組織形式。同時，要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。

試劑貯存和準備區(qū)：
該實驗區(qū)主要進行的操作作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區(qū)，不得經過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內，并在本區(qū)內制備成所需的貯存試劑。對氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴格的要求。

標本制備區(qū)：
該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為相對于臨近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)域進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應避免在本區(qū)域內不必要的走動。

擴增反應混合物配制和擴增區(qū)：
擴增反應混合物配制和擴增區(qū)：該區(qū)域主要進行的操作為NDA或cDNA擴增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA（來自樣本制備區(qū)）的加入和主反應混合液（來自試劑貯存和制備區(qū)）制備成反應混合液等也可以在本區(qū)域內進行。在巢氏PCR測定中，通常在第一輪擴增后必須打開反應管。因此巢氏擴增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區(qū)域內進行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)域漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區(qū)內不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。

擴增產物分析區(qū)：
該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測，此區(qū)域可不設。本區(qū)是最主要的擴增產物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于臨近區(qū)域為負壓，以避免擴增產物從本區(qū)域擴散至其它區(qū)域。

完備的實驗室配套設施：
完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件，應根據(jù)各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器，如超凈工作臺、生物安全柜、離心機、加樣器等。

實驗室凈化工程設計主要是通過人為的手段，應用潔凈技術實現(xiàn)控制室內空氣中塵埃、含菌濃度、溫濕度與壓力、以達到所要求的潔凈度、溫濕度和氣流速度等環(huán)境參數(shù)?？諝鉂崈舳仁侵笣崈艨諝猸h(huán)境中空氣含塵量程度，空氣潔凈度的級別以含塵濃度劃分。潔凈度是指每升空氣中所含粒徑≥0.5um的塵粒的總顆粒。
實驗潔凈室一般實施兩級隔離，一級隔離通過生物安全柜、負壓隔離器、正壓防護服、手套、眼罩等實現(xiàn);二級隔離通過實驗室的建筑、空調凈化和電氣控制系統(tǒng)來實現(xiàn)。但由于凈化空調需要風量小為了安全起見，風量都按大的估算，一般都要超過規(guī)范規(guī)定，物別是百級以上，冷熱負荷在要求不是很嚴格的情況可能估算，現(xiàn)在專門有凈化空調機組，可以直接利用。二級~四級生物安全實驗室應實施兩級隔離。一般實驗室裝備有:超凈工作臺、生物安全柜、邊臺或不銹鋼操作臺、洗滌臺等。

以PCR實驗室為例(PCR即聚合酶鏈式反應)，是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法，也是生物學、醫(yī)學臨床等領域廣泛應用的實驗技術。其特點是能將微量的DNA大幅增加，實驗室通常分為四個區(qū)域，即：試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū)(如使用全自動分析儀，區(qū)域可適當合并)。進入各個區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行，不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開時，不得將工作服帶出。

實驗室潔凈裝修，試劑儲存和準備室(標本制備區(qū))，儀器主要配置有：冷凍離心機、生物安全柜、冰箱、可移動紫外燈、全自動力核酸蛋白純化儀、專用工作服和工作鞋等。擴增反應混合物配制和擴增區(qū)配置有：冰箱、高速離心機、超凈工作臺、PCR儀(要求負壓狀態(tài))、可移動紫外燈、微量加樣器、核酸擴增儀等。擴增產物分析區(qū)主要配置有：移液器、振蕩器、超凈工作臺、毛細管電泳儀、冰箱、離心機、微量加樣器、可移動紫外燈等。